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        無血清細胞凍存液操作步驟

        發(fā)布日期: 2023-09-04
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          細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法,其中細胞凍存液,作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,不僅僅是說只是用來進行細胞的保存,在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關鍵作用,因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。
          無血清細胞凍存液是指不含血清和動物源成分的細胞凍存液,對比傳統細胞凍存液存在的優(yōu)勢:
          1.是一種通用型的細胞凍存液,可用于凍存人和各種動物細胞株;
          2.凍存液配方,即開即用,方便快捷;
          3.非程序降溫,-80℃低溫冰箱長期凍存,也可液氮凍存;
          4.特別配方(主要成分為DMSO和氨基酸)具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力;
          5.不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全;
          6.可孔板(細胞培養(yǎng)板)凍存,可用于雜交瘤細胞的凍存液.
          無血清細胞凍存液操作步驟,簡單、方便:
          一、細胞冷凍保存方法:
          選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。
          凍存管凍存方式:
          1、按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。
          2、按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。(參考:5×105至5×106 cells/ml)。
          3、取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量,置于離心管中,離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min)。移去離心管中的上清液。
          4、加入適量無血清細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度為5×105至5×106 cells/ml。緩慢混合均勻,制成細胞混合液。
          5、將離心管中的細胞混合液分裝于已標示的冷凍保存管中。
          6、直接將含細胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱,冷凍保存。
          7、若研究者需要液氮保存時,可先放入-80℃冰箱過夜后,再移至-196℃液氮罐。
          原位凍存方式:
          1、從培養(yǎng)狀態(tài)良好的細胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清吸取干凈。
          2、加入適量無血清細胞凍存液于培養(yǎng)孔板中,充分浸潤細胞。
          3、蓋上蓋板,做好密封措施,防止染菌。
          4、直接將含凍存液的細胞培養(yǎng)板放入-80℃冰箱,冷凍保存。
          二、凍存細胞復蘇方法
          凍存管復蘇方式:
          1、從冰箱取出凍存細胞管,立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
          2、待凍存的細胞懸液融化后,立即加入1 ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細胞培養(yǎng)基的試管中,混合均勻。
          3、離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min),移去上清液。
          4、清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液。
          5、加入適量新鮮培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后,將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。
          6、鏡檢后,研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。
          原位復蘇方式:
          1、從冰箱取出凍存培養(yǎng)板,立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
          2、待凍存的細胞懸液融化后,輕輕吸去細胞凍存液,按照常規(guī)換液操作加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)進行培養(yǎng)。
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